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e travail avait pour principal objectif de rechercher des éléments expérimentaux de validation d'une méthode de transformation génétique de masses embryonnaires de Pin Maritime (Pinus Pinaster Ait) via Agrobactérium tumefaciens (souche C58pMP90/pCambia1301). Une première étude de l'origine des lignées transformées disponibles à l'aide de 5 loci microsatellites chloroplastiques s'est révélée problématique en raison de la faible variabilité allélique observée (-4 allèles/loci). Nous avons toutefois pu détecter des erreurs évidentes d'étiquetage de nos lignées transformées. Une seconde étude nous a permi de vérifier l'intégration (PCR ciblée) et la stabilité de l'expression (test GUS) du gène rapporteur uidA (activité glucuronidase) et du gène de sélection hpt (résistance à l'hygromycin[...]

e travail avait pour principal objectif de rechercher des éléments expérimentaux de validation d'une méthode de transformation génétique de masses embryonnaires de Pin Maritime (Pinus Pinaster Ait) via Agrobactérium tumefaciens (souche C58pMP90/pCambia1301). Une première étude de l'origine des lignées transformées disponibles à l'aide de 5 loci microsatellites chloroplastiques s'est révélée problématique en raison de la faible variabilité allélique observée (-4 allèles/loci). Nous avons toutefois pu détecter des erreurs évidentes d'étiquetage de nos lignées transformées. Une seconde étude nous a permi de vérifier l'intégration (PCR ciblée) et la stabilité de l'expression (test GUS) du gène rapporteur uidA (activité glucuronidase) et du gène de sélection hpt (résistance à l'hygromycine B) chez les lignées transformées et surtout les plantes obtenues à partir de ces lignées. Les résultats obtenus ici contribuent à la validation de l'ensemble du processus de
transformation génétique du Pin Maritime au niveau moléculaire. Enfin, la réalisation de différentes constructions associant 3 gènes d'intérêt (bar qui confère la résistance à la phosphinothricine, et deux gènes confidentiels x et y) et 3 promoteurs forts (promoteurs simple ou en double copies arrangées en tandem de l'ARN 35S du virus de la mosaïque du chou-fleur, promoteur du gène de l'ubiquitine de maïs) au cours d'une troisième étude a permis de valider l'utilisation du vecteur pCambia1301 comme véhicule de gènes d'intérêt chez le Pin Maritime. Au travers de ce dernier travail, nous avons également pu développer une nouvelle méthode de sélection des cellules de transformées qui n'est plus basée sur l'utilisation de l'antibiotique hygromycine B mais sur le principe actif de l'herbicide Basta ( la phosphinothricine). Les perspectives d'amélioration et d'utilisation de cette méthode de transformation génétique du Pin Maritime sont discutées.