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Les microsatellites sont des marqueurs moléculaires codominants et très variables qui offrent des avantages intéressant par rapport aux autres marqueurs moléculaires. Leur développement passa cependant par des démarches coûteuses et lourdes à mettre en oeuvre, qui nécessitent la création de banques d' ADN enrichies en motifs microsatellites, le séquençage de nombreux clones et leur opàtimisation en PCR. Deux autres approches alternatives sont présentées dans cette étude. La première repose sur le transfert d'amorces déjà mises au point chez des espèces phylogénétiquement proche du pin maritime. La seconde est basée sur une recherche in silico de motifs microsatellites dans les bases de données de séquences exprimées (EST).
Une cetaine de paires d'amorces dessinées à partir de séquen[...]

Les microsatellites sont des marqueurs moléculaires codominants et très variables qui offrent des avantages intéressant par rapport aux autres marqueurs moléculaires. Leur développement passa cependant par des démarches coûteuses et lourdes à mettre en oeuvre, qui nécessitent la création de banques d' ADN enrichies en motifs microsatellites, le séquençage de nombreux clones et leur opàtimisation en PCR. Deux autres approches alternatives sont présentées dans cette étude. La première repose sur le transfert d'amorces déjà mises au point chez des espèces phylogénétiquement proche du pin maritime. La seconde est basée sur une recherche in silico de motifs microsatellites dans les bases de données de séquences exprimées (EST).
Une cetaine de paires d'amorces dessinées à partir de séquences d'ADN génomique de Pinus radiata et d'ADNc de Pinus taeda ont été utilisées. Pour 75% des couples d'amorces testés, l'optimisation des principaux paramètre conditionnant le succès de la PCR (température d'hybridation, concentration en ADN génomique et en MgCl2, nombre de cycles en PCR) a permis d'obtenir des profils PCR relativement simples chez Pinus pinaster. La présence de motifs microsatellites a ensuite éte vérifiée notamment par le séquençage d'allèles chez cette espèce.Douzes locus ont été localisés sur les deux cartes génétiques du pin maritime, indiquant un bonne transférabilité de ce marqueur au sein de l'espèce. Par ailleurs, ces locus ayant déjà été positionnés sur la carte génétique de P. radiata, elle même alignée avec celle de P. taeda, nous avons pu identifier les groupes de liaisons horemologues entre ces trois espèces, prolongeant ainsi le travail de cartographie comparée
actuellement au cour.
Les résultats obtenus nous encouragent à poursuivre le developpement de marqueurs microsatellites chez le pin maritime, aussi bien pour des études de cartogrphie génétique et de détection de qtl, que pour des études de diversité et de conservation de ressources génétiques. La création d'une banque enrichie en microsatellites chez le pin maritime permettrait d'avoir accès à de nouveaux marqueurs "hyper variables", utilisables pour l'amélioration génétique de cette espèce.