Régulation transcriptionnelle de la production de... Infodoc

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Régulation transcriptionnelle de la production de la protéase alcaline exocellulaire chez la levure Yarrowia lipolytica

Titre :	Régulation transcriptionnelle de la production de la protéase alcaline exocellulaire chez la levure Yarrowia lipolytica : stratégie d'étude du promoteur du gène de structure XPR2 par délétions Ajouter au panier
Auteur(s) :	Sylvie Pouteau, Auteur (et co-auteur) Jean-Marc Nicaud, Responsable de stage Institut national agronomique Paris-Grignon, Etablissement de soutenance
Type de document :	Mémoire
Sujets :	Yarrowia lipolytica ; Levure (agent de fermentation) -- Thèses et écrits académiques
Résumé :	La production de la protéase alcaline exocellulaire par la levure industrielle Yarrowia lipolytica est fortement régulée par la source d'azote fournie et peut atteindre des niveaux élevés. Afin d'étudier la régulation de cette expression par génération de délétions dans le promoteur de son gène de structure XPR2, nous avons entrepris de construire un gène hybride constitué par ce promoteur et la région codante du gène lacZ de E. coli. Pour cela, le promoteur a été sous-cloné dans pBR322 et un site de fusion BamHI a été créé par mutagénèse dirigée immédiatement après le premier codon traduit (ATG). Le gène de sélection LEU2 de Y. lipolytica a été introduit dans ce vecteur pour permettre son intégration homologue dans le chromosome. Suite à des phénomènes d'instabilité, la dernière éta[...] La production de la protéase alcaline exocellulaire par la levure industrielle Yarrowia lipolytica est fortement régulée par la source d'azote fournie et peut atteindre des niveaux élevés. Afin d'étudier la régulation de cette expression par génération de délétions dans le promoteur de son gène de structure XPR2, nous avons entrepris de construire un gène hybride constitué par ce promoteur et la région codante du gène lacZ de E. coli. Pour cela, le promoteur a été sous-cloné dans pBR322 et un site de fusion BamHI a été créé par mutagénèse dirigée immédiatement après le premier codon traduit (ATG). Le gène de sélection LEU2 de Y. lipolytica a été introduit dans ce vecteur pour permettre son intégration homologue dans le chromosome. Suite à des phénomènes d'instabilité, la dernière étape de construction consistant à introduire le gène lacZ n'a pu être réalisée. Par ailleurs, un site de restriction unique SmaI a été inséré dans le promoteur à 215 pb en amont de l'ATG, afin de servir de site de départ à des digestions ménagées par l'exonucléase Bal31. L'étude de la croissance de plusieurs souches de Y lipolytica en milieu minimum nous a conduit à choisir la lignée 21501--11 pour servir de souche réceptrice à ces constructions. Dans le but de pouvoir comparer l'expression de la bêta-galactosidase sous le contrôle du promoteur du gène XPR2 dans un contexte Xpr+ et Xpr-,, nous avons tenté de construire deux souches isogéniques Xpr+ et Xpr- en détruisant le gène XPR2 dans cette souche. Pour cela, nous avons construit un vecteur de disruption pINA157 portant le gène de sélection LYS5 de Y lipolytica inséré à l'intérieur du gène XPR2. Des difficultés dans la transformation de la souche 21501-11 ne nous ont pas permis de substituer cette construction au gène XPR2 dans le chromosome. (résumé de l'auteur)
Date de publication :	1987
Format :	1 vol. (30 p.) / fig., tabl., bibliographie / 30 cm
Langue(s) :	Français
Organisme d'accueil :	Laboratoire de génétique des microorganismes de l'INAPG
Lien vers la notice :	https://infodoc.agroparistech.fr/index.php?lvl=notice_display&id=20359