Infodoc : Sciences, Techniques et Culture

Dans le cadre d'un programme intégré de manipulation génétique du Pin Maritime (Pinus pinaster Ait.) développé par l'AFOCEL, une méthode de transformation des ESM (embryonal suspensor Mass) par A. tumefaciens est optimisée afin d'améliorer l'efficacité quantitative (nombre de génotypes) et quantitative (rendement) de transformation. Trois sources de variation ont été étudiées : 1) le génotype des ESM (10 génotypes testés), 2) la souche bactérienne (3 souches testées) et 3) l'âge des ESM (moins de 50 sous-cultures vs plus de 100 sous-cultures). L'effet génotype sur le rendement total ou en lignées primaires (issues d'évènements indépendants) est significatif quel que soit le paramètre de rendement retenu (nombre de lignées résistantes à l'ghygromycine = lingées H+ ou bien nombre de lig[...]

Dans le cadre d'un programme intégré de manipulation génétique du Pin Maritime (Pinus pinaster Ait.) développé par l'AFOCEL, une méthode de transformation des ESM (embryonal suspensor Mass) par A. tumefaciens est optimisée afin d'améliorer l'efficacité quantitative (nombre de génotypes) et quantitative (rendement) de transformation. Trois sources de variation ont été étudiées : 1) le génotype des ESM (10 génotypes testés), 2) la souche bactérienne (3 souches testées) et 3) l'âge des ESM (moins de 50 sous-cultures vs plus de 100 sous-cultures). L'effet génotype sur le rendement total ou en lignées primaires (issues d'évènements indépendants) est significatif quel que soit le paramètre de rendement retenu (nombre de lignées résistantes à l'ghygromycine = lingées H+ ou bien nombre de lignées résistante à l'hygromycine exprimant le gène uidA = lignées GUS+). C58pMP90 s'est révélée être une souche bien adaptée pour transformer les ESM de Pinus pinaster. Les
rendements observés (13-95 lignées par gram) sont en effet significativement plus importants que ceux obtenus avec LBA4404 (7-38 lignées H+ par gram) et AGLI (1 lignées H+ par gram). Toutefois, la souche LBA4404 a permis de transformer un génotype récalcitrat à C58pMP90. L'âge des ESM, enfin, est un important facteur à considérer pour préserver la capacité d'un génotype à être transformé. Les jeunes lignées réactivées à partir d'un stock cryoconservé sont plus facilement transformées que les lignées âgées.